杂交寿的无菌收获、筛选、疾速滋生与离体种质保留

　　岩鸣 @ 2005-05-30 15:53
　　杂交寿的无菌播种、筛选、倏地繁殖与离体种质保存
　　Sterile Seeding、Screening、Rapid Propagation and Conservation in Vitro of Haworthia retusa hybrid
　　1. 资料与办法：
　　1.1材料
　　杂交寿亲本植株来自日本カクタヌ专门家同盟，母本H. bayeri，父本H.retusa。
　　1.2杂交与种子处置
　　杂交在2~3月份进行，取舍晴天下战书3:00~4:00采集父本花粉室温保存；去掉母本雄蕊，并用硫 酸玻璃纸袋罩好。越日上午10：00左右授粉，授粉时剖出母本柱头，把花粉平匀地涂抹在柱头上，授粉后用硫 酸纸筒罩住并适当遮光。授粉后5d子房开始膨大，两周应用透明胶带固定果实四周，防止种子成熟后弹射出去。 大约1个月左右果实变黑成熟，剪下果荚放阴凉处天然风干，从干瘪的果实中取出种子备用。
　　1.3培养基与种质保存条件
　　（1） 无菌播种培养基：空白MS；
　　（2） 筛选培养基：1/2MS+NAA0.1 mg/L+琼脂 10g/L；
　　（3） 继代与快捷繁殖：MS+6BA1 mg/L +KT1 mg/L；
　　（4） 生根壮苗培养基：1/2MS+NAA0.2 mg/L；
　　（5） 种质保存培养基：1/2MS+6BA0.5mg/L +NAA0.1mg/L+PVP5g/L（pH=5.8 Tris/HCl Buffer配置）。
　　根据不同培养目标，分辨设计了光照强度和温度前提，无菌播种和继代快繁1500 lx，25±2°C；筛选培养3000 lx，25±2°C；种质保存2000 lx，15±2°C。
　　2.成果与剖析
　　2.1无菌播种与萌生
　　将成熟的种子包裹于双层纱布中，用0.1%HgCl2消毒15 min，无菌水冲刷4~6次，直接将种子平均地撒播在无菌播种培养基上，并置于培养室中。大约5~7 d种子开始萌动，14 d内根本上出齐,Prada Flats，萌发率62.86%。又经过10 d左右，第一片真叶产生，大约30 d后可以形成存在2~3片真叶的小植株。
　　2.2筛选培养
　　将构成的小植株转入筛选造就基中，10 d后成长速度加快,perfume store，叶片变厚，叶顶部的“窗”开始造成，约80%的植株产生明显的粗壮根系。30~60 d内小植株逐步表示出一些园艺外形，通过以下指标进行人工筛选：叶片短厚、“窗”大或“窗”透明度高、“窗 ”面花纹显著、体色异样、嵌合性叶绿素缺陷以及其余有欣赏价值的变异等。通过筛选得到有园艺价值的个体比例 大约30%，但未见嵌合性叶绿素缺点渐变呈现。
　　2.3继代与快速繁殖
　　将筛选得到的植株去掉大部门根系，整株转入继代培养基中，10 d后生长速度下降，开始涌现丛生偏向，大约20~30 d形成丛生苗，大批侧芽叶腋、植株基部产生，少数从根系基部产生。大约20%的植株基部有少量绿色愈伤组织 形成或出现膨大胀裂景象，但其生长速度并不快，且比拟局限。将得到的丛生芽进行恰当宰割，切取侧芽转入新的 培养基中，每15~20 d继代一次，继代倍率为3~4。若在继代进程中产生适度分化乃至玻璃化现象，可转入空缺MS传1~2代即可 改正。
　　2.4生根培养
　　将继代得到的较大侧芽切下，转入生根培育基中，大概15~20 d开端生根，30 d当前可以发生2~5条粗大直根，生根率100%,dolce & gabbana makeup。此时可加大光照度至3000 lx，也能够采取散射阳光取代荧光照射 。经由强光照耀后，局部敏感个体的遗传性状会更加凸起，尤其以叶片变红、“窗”面积增大跟叶短 厚较为显明。
　　2.5出瓶移栽
　　植株生根后翻开瓶口，炼苗2~3 d，：掏出植株，仅保存1~2条粗根,supra forums，去掉其余根系，遮荫风干2~3 d，扦插于经高温灭菌的蛭石中，喷施“四抗”（青霉素、链霉素、甲硝唑及制霉菌素）溶液。大约3 0 d后可见植株膨大，并开始生长，成活率在80%以上。
　　2.6种质保存
　　筛选得到的有价值个体有必要进行种质保留，以便用于今后的大量滋生。将继代培养得到的丛生苗进行适当分 割转入种质保存培养基中，置于15±2°C保存。3~10 d后叶片开始出现轻度萎缩，叶片发红，逐渐转入休眠状况，但仍坚持低程度的增殖。依据植株的状态和不同个体 的增殖速度来断定继代周期，基础把持在半年转接一次，假如某个体增殖速度快，也可抉择3~4个月转接一次。 经保存的丛生苗可以顺利回到继代增殖阶段，而无明显缓冲期。这样，能较长时光地保存优良种质资 源。
　　3探讨
　　寿是百合科十二卷属(旧称蛇尾兰属)的小型肉质植物，又名透明宝草，原产南非开普省。其植株矮型，叶呈 莲座状排列，叶顶端透明并有花纹，形成漂亮的“窗”,ferragamo fragrance。形状精致雅观，很适于植物园收集及家庭养护，是一种很有观赏价值的园艺植物质源，日本和美国对该物种进行 了大量的园艺学研讨。因为寿的相似种或变异种良多，杂交育种更有利于筛选有园艺价值的个体，但因为繁殖率很 低，故而难于普及。将无菌收获、疾速繁殖和种质保存技巧利用于寿的杂交育种是解决十二卷属动物育种、繁殖、 遍及的有效道路之一，同时本文供给的杂交种筛选和种质保存方式对该属植物的园艺学研究也有必定 的参考价值。
　　发表于《华北农学报》2004，19（4）